罂粟壳含有20多种生物碱,其中以吗啡、可待因,那可丁、罂粟碱等为主要成分。具有镇痛、催眠、呼吸抑制与镇咳作用,一般用于医药行业。我国禁止在食品中加入罂粟壳。
实验部分
1.高效液相色谱仪;C18不锈钢柱(VP—ODS)150L×4.6;SPD一10AVP紫外检测器。
2.试剂吗啡、可待因、那可丁、蒂巴因、罂粟碱标准品,硅钨酸、三氯乙酸、石油醚、乙醚、甲醇、氨水均为分析纯。
3.色谱条件柱温:30℃;流动相:甲醇:水=98:2;流速: mE/min;uV检测波长:216am。
4.实验方法
(1)原理呈游离态的生物碱,多不溶于或难溶于水,而易溶于有机溶剂。生物碱可与酸结合生成盐,易溶于水,而不溶于有机溶剂中,生物碱的盐类在碱性溶液中,生物碱又会游离出来。
(2)标准品的测定取少量罂粟碱、吗啡、可待因、那可丁、蒂巴因标准品,分别加入1ml甲醇溶液,待检。
(3)罂粟壳的前处理取适量罂粟壳加200ml水煮沸10rain,过滤。滤液待检。
(4)样品的检测取50ml汤料及50rIll加有罂粟壳的滤液,分别用10%HCI调节pH1.8—2.0,用50ml石油醚分离样品中脂肪,去掉醚层,将去除脂肪后的样液中加入20%三氯乙酸10ml沉淀蛋白质,离心分离(4500r/min)20rain后,取上清液,加5%硅钨酸5ml摇匀,使沉淀作用完全,置沸水浴中加热5min,放冷,离心分离(3000r/rain)使之沉淀完全。取沉淀加浓氨水至沉淀完全溶解,然后将溶液转入分液漏斗中,取5ml乙醚分别振摇提取3次,合并提取醚层,蒸干醚层,然后放人60℃烘箱中挥蒸2h,取出冷却后加入甲醇定容至2ml,供色谱分析用。
结果与讨论
1.空白试验经实验表明,样品处理过程中加入的试剂除所加乙醚有干扰峰外,其他不干扰待测组分的测定,但所加的乙醚经过烘箱60℃挥蒸2h后,即可消除干扰峰。
2.样品处理条件试验由于火锅汤料中成分较复杂,又含有大量的脂肪和蛋白质,因此用硅钨酸沉淀生物碱前,必须先除去这些成份,用石油醚除去脂肪,用三氯乙酸除去蛋白质,然后用硅钨酸沉淀生物碱,就可以得到满意结果。
3.仪器分离条件选择经实验表明,只有当流动相甲醇:水=98:2、柱温30℃、流速1.3ml/min、检测波长为216nm时,分离效果较好,可得到满意图谱。
4.色谱图分析
(1)罂粟壳的鉴定罂粟壳中所含生物碱有20多种,主要是罂粟碱、码啡、那可丁、可待因、蒂巴因5种,5种物质的保留时间分别为罂粟碱6.89min、那可丁1.89rain、吗啡2.5min、蒂巴因1.71min、可待因5.65min。
(2)汤料中罂粟壳的鉴定
在罂粟壳、汤料、汤料+罂粟壳3种试液的分析图谱中,罂粟壳提取液和汤料的色谱图明显不同,主要表现在主成份的保留时间、相对吸收峰面积上,而加有罂粟壳汤料的色谱图正好是罂粟壳提取液和汤料2个色谱图的叠加,说明汤料和罂粟壳的主要成分明显不同,这对罂粟壳的鉴定有重要意义。
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